Caractรจres remarquables
La plante est une liane volubile de 3 ร 4m, ligneuse ร la base, capable de sโenrouler autour des arbustes.
Les feuilles sont alternes, paripennรฉes avec 7 ร 10 paires de folioles.
Les fleurs sont de couleur rose, regroupรฉes en courtes grappes pรฉdonculรฉes avec des bractรฉes ร la base du calice.
Les gousses mesurent environ 3 cm de long et contiennent 5 ร 6 graines ovoรฏdes de couleur rouge vif comportant une tache noire (Boullard, 2001 ; Adjanohoun et coll, 1979).
Habitatย
Cโest une espรจce pantropicale, localisรฉe dans les forรชts denses et les galeries forestiรจres en savane (Adjanohoun et coll, 1979).
Emploisย
Elle est considรฉrรฉe comme une plante toxique, son utilisation est surtout externe :
? Les graines sont รฉcrasรฉes pour traiter les abcรจs, les inflammations des bras et des jambes ;
? Le macรฉrรฉ ou dรฉcoctรฉ des feuilles est employรฉ contre les conjonctivites ;
? Les feuilles sucrรฉes sont aussi utilisรฉes comme antitussif et antigastralgique (Kerharo et Adam, 1974).
Dans les ouvrages sacrรฉs des indes, les graines servaient de mรฉdicament contre les affections du systรจme nerveux et des maladies de la peau (Kerharo et Adam, 1974).
Elles sont aussi utilisรฉes pour confectionner des chapelets dโoรน le nom dโarbre ร chapelet donnรฉ ร la plante (Arbonnier, 2002).
Au Mali, la plante est employรฉe comme antitussif et aphrodisiaque (Adjanohoun et coll, 1979 ).
Drogue
Elle est constituรฉe par les graines.
Les graines sont ovoรฏdes, brillantes, bicolores : la rรฉgion du hile est pourpre presque noire, le reste รฉtant rouge (Bruneton, 1987).
Phytochimie
On savait que les graines contiennent une phytoxine protรฉique : lโabrine qui est une aminoacide, le N- mรฉthyltryptophane, constituรฉe de lโalbumine et la globine .
En plus de lโabrine, les graines renferment : de lโacide abrique, des terpรจnes, du ฮฒ sistรฉrol, du stigmastรฉrol, de lโacide gallique, un alcaloรฏde, de lโacide polygalacturonique, du pentosane, des sucres rรฉducteurs, un glucoside et une hรฉmagglutinine qui se comporte comme enzyme lipolitique (Kerharo et Adam 1974).
Les racines, les tiges, et les feuilles sont riches en glycyrrhizine qui donne aprรจs hydrolyse deux molรฉcules dโacide glucuronique (Iserin et coll, 2001).
Pharmacologie
La toxicitรฉ de la graine nโest possible quโune fois le tรฉgument externe dur est enlevรฉ, sinon elle รฉchappe ร la dรฉsintรฉgration lors de la digestion et la toxine ne serait pas libรฉrรฉe (Kerharo et Adam, 1974).
Dโaprรจs Diacono, lโextrait aqueux des graines rรฉcentes possรจdent une toxicitรฉ plus รฉlevรฉe que celui des anciennes graines sur le cobaye (Desai et Sirsi, 1966).
Par contre les extraits alcooliques sont douรฉs dโune activitรฉ antibactรฉrienne sur : Staphylococcus aureus, Escherichia coliโฆ .
Cette activitรฉ antibactรฉrienne est surtout รฉlevรฉe avec les extraits ร base de tรฉgument (Desai et Sirsi, 1966).
Par ailleurs des effets abortives et tรฉratogรจnes de lโextrait des graines ont รฉtรฉ observรฉs aprรจs des essais histopathologiques sur des rats et des souris (Iserin etcoll, 2001).
Caractรจres remarquables
Arbuste buissonnant, originaire dโAmรฉrique tropicale, long de 2 ร 3 m, ramifiรฉ ร la base, portant des branches tendres et cassantes.
Il porte de grandes feuilles composรฉes, pennรฉes, ayant environ 10paires de folioles opposรฉes, arrondies aux extrรฉmitรฉs.
Les fleurs sont jaunes trรจs ornementales, situรฉes ร la cime oรน elles forment des grappes terminales.
Le fruit est une gousse droite ร bordures parallรจles, disponible presque toute lโannรฉe (Boullard, 2001; Lavergne et coll, 1989).
Habitat
Plante originaire dโAmรฉrique, introduite dans toutes les rรฉgions tropicales, spontanรฉe ou procultivรฉe, rarement retrouvรฉe dans les agglomรฉrations (Adjanohoun et coll, 1983).
Emplois
Les feuilles fraรฎches รฉcrasรฉes sont utilisรฉes pour traiter les affections de la peau (Co, 1989).
Elles sont aussi considรฉrรฉes comme purgatif en prรฉparation buvable (Quisumbing, 1978).
Pour le traitement des cรฉphalรฉes, on place autour de la tรชte un bandeau contenant un mรฉlange de feuilles fraรฎches, dโรฉcorce et de racines pilรฉes (Kerharo et Adam, 1974).
Contre les douleurs articulaires, le dรฉcoctรฉ des feuilles est administrรฉ par voie orale ou utilisรฉ comme bain (Kerharo et Adam, 1974).
Hormis le traitement des maladies, la plante possรจde dโautres usages :
? La plante entiรจre sert de dรฉcor dans les jardins ;
? Lโรฉcorce est utilisรฉe dans les tanneries pour confectionner le cuir ;
? Les feuilles servent ร prรฉparer un poison de pรชche (Arbonnier, 2002).
Phytochimie
La plante entiรจre contient une quantitรฉ importante dโacide chrysophanique surtout dans les fruits et de lโacide cyanhydrique.
Hauptmann et Lacerda Nazario ont isolรฉ des feuilles des anthraquinones rรฉduites qui par oxydation de la rhรฉnine produisent du glucose et du rhamnose.
Dans les graines, Tiwari et Coll ont mis en รฉvidence la chrysophanol et fait lโanalyse des lipides.
Bouquet caractรฉrisa dans les feuilles et les รฉcorces de lโespรจce congolaise des saponosides et des quinones (Kerharo et Adam, 1974).
Pharmacologie
Lโusage de Cassia alata comme purgatif se justifie par la prรฉsence dโanthraquinones dans les feuilles (Quisumbing, 1978).
Le dรฉcoctรฉ des feuilles fraรฎches a une activitรฉ anti-fongique dans le traitement du pityriasis versicolore, de lโeczรฉma et le pied dโathlete.
En effet, lโacide chrysophanique trouvรฉ dans plusieurs parties de la plante, produit une action curative sur les dermatoses (Co, 1989).
Dโautre part, des รฉtudes ayant portรฉ sur les extraits bruts de feuilles ont prouvรฉ des activitรฉs antalgiques et anti-inflammatoires de la plante (Villasenor et coll, 2002).
Gรฉnรฉralitรฉ sur les lectines et le groupe sanguin Aย
Les lectinesย
Dรฉfinitionย
Les lectines sont des protรฉines animales ou vรฉgรฉtales capables de se fixer aux hydrates de carbone de la surface cellulaire et provoquer la liaison des cellules en amas (ABOVIE sur www.abovie.com).
Dโautre part, les lectines sont considรฉrรฉes comme une famille hรฉtรฉrogรจne de rรฉcepteurs qui reconnaissent certaines structures oligosaccharidiques et jouent un rรดle majeur dans les processus dโinteractions entre les cellules (Hebert, 2001).
Historique
Les lectines ont รฉtรฉ dรฉcrites pour la premiรจre fois en 1888 par Stillmark ;depuis lors, beaucoup de travaux furent consacrรฉs aux lectines (Roken, 1948).
Ainsi des graines de cรฉrรฉale, la recherche des lectines fut รฉlargie aux lรฉgumineuses, ร la laiterie โฆ (DโAdamo, 1999).
Elles ont surtout รฉtรฉ utilisรฉes pour รฉtudier la physiologie ou certaines activitรฉs immunologiques des cellules (Sharon, 1972).
Dans les annรฉes 40, la purification des lectines a permis leur usage dans la dรฉtermination des groupes sanguins (Bird, 1974).
La spรฉcificitรฉ des lectines aux sucres fut vรฉrifiรฉe sur plusieurs formes de vie (animaux, insectes, mycรจtes ) pour expliquer des phรฉnomรจnes biologiques : dรฉfense des plantes contre les herbivores, insectes, mycรจtes (Pusztai et Ewen, 1999).
Ce nโฒest quโฒau cours des annรฉes 70 que la recherche sur les lectines a commencรฉ ร augmenter dans le monde entier (Krispin, 1999).
Propriรฉtรฉs
Les lectines sont des protรฉines hydrosolubles retrouvรฉes surtout dans les graines des lรฉgumineuses (Etzer, 1994).
Elles ressemblent ร des glycoprotรฉines de la membrane des cellules vรฉgรฉtales et se comportent comme des anticorps en assurant un rรดle dรฉfensif contre les bactรฉries et les champignons (Guignard, 1985).
Ce sont des substances thermolabiles, responsables de la toxicitรฉ de certaines plantes : ricin, jรฉquirity, haricot โฆ (Bruneton, 1993).
Elles sont aussi reconnues pour leur spรฉcificitรฉ aux sucres, ce qui a permis leur usage dans la dรฉtermination des groupes sanguins (Bird, 1974) et ร lโรฉtude des structures osidiques de la membrane cellulaire, importantes pour รฉlucider certains comportements de la cellule (Hebert, 2001).
Description de quelques lectines connues
Lโabrine et la ricine sont des lectines ร activitรฉ hรฉmagglutinante extraites respectivement de lโarbre ร chapelet et du ricin, reconnues pour leur toxicitรฉ.
Elles sont constituรฉes de deux fragments protรฉiques :
– une chaรฎne A : incapable de franchir les membranes cellulaires, inhibiteur de la synthรจse des protรฉines ;
– une chaรฎne B : non cytoxique, assurant la reconnaissance des sucres membranaires et la fixation de la lectine sur le rรฉcepteur pour faciliter la translocation de lโunitรฉ A ร travers la membrane (Bruneton, 1987).
La phasine est une phytoagglutinine provenant du haricot, spรฉcifique aux hรฉmaties du groupe A, constituรฉe de deux dimรจres canoniques rattachรฉs par des liaisons bรชta (Hamelryck, 1996).
En gรฉnรฉral, on distingue trois types majeurs de lectines vรฉgรฉtales que sont :
– Les mรฉrolectines incapables de se lier aux cellules (lectines des orchidรฉes) ;
– Les hololectines capables dโagglutiner les cellules (lectines des lรฉgumineuses) ;
– Les chimรฉrolectines qui se comportent soit en hololectines ou en mรฉrolectines (ricine).
Le groupe sanguin A
Dรฉfinition
Les groupes sanguins constituent un ensemble dโantigรจnes allotypiques regroupรฉs en systรจmes gรฉnรฉtiquement induits (Sultan, 1978). Le groupe sanguin A est une composante du systรจme ABO, caractรฉrisรฉ par un antigรจne non protรฉique, donc qui nโest pas un produit direct de gรจne, de nature glucidique : la N-acรฉtylgalactosamine (Genetet et Muller, 1999).
Structure chimique
Le groupe sanguin A comprend plusieurs variantes antigรฉniques ; en pratique courante, ce nโest que deux phรฉnotypes qui sont recherchรฉs : A1(80%) et A2 (20%) possรฉdant 2 ร 3 fois moins dโantigรจnes que A1 (Bastie, 1998).
Lโexpression phรฉnotypique de lโantigรจne A est sous la dรฉpendance du gรจne A responsable de la formation de lโantigรจne A dont la structure chimique est la NAcetyl- D-Galactosamine (representรฉ ci-dessous).
Lโantigรจne A ainsi constituรฉ est accolรฉ ร la substance H qui est la structure de base des groupes sanguins du systรจme ABO (Najman, 1994).
Les lectines spรฉcifiques au groupe sanguin Aย
La spรฉcificitรฉ de la lectine du Phaseolus limensis au groupe sanguin A est due ร son affinitรฉ trรจs รฉlevรฉe de liaison ร la N-acรฉtyl galactosamine (Hamelryck et coll, 1996).
Cette lectine a une structure quaternaire semblable ร celle de la phytoagglutinine de la Glycine soja qui agglutine en plus du GalNac, le galactose, et les glycoprotรฉines ร galactose terminal (Sharon, 1972).
La lectine du Dolichos biflorus agglutine fortement les hรฉmaties A1 et trรจs faiblement celles du type A2 (Chassaigne, 1984).
Cela sโexplique par la prรฉfรฉrence de cette lectine au trisaccharide GalNac ฮฑ1-3 Fuc ฮฑ1-2 Gal beaucoup plus retrouvรฉ chez les hรฉmaties A1 (Hamelryck et coll, 1999).
Sรฉlection des hรฉmaties du groupe A
Les hรฉmaties du groupe A ont รฉtรฉ testรฉes ร lโanticorps anti A1 : les hรฉmaties qui ont produit une forte agglutination sont du sous groupe A1et celles qui ont donnรฉ une agglutination trรจs faible ou un test nรฉgatif sont du groupe A2 .
Les hรฉmaties ainsi obtenues ont รฉtรฉ au prรฉalable soumises ร un lavage puis ร une dilution.
Lavage des hรฉmaties
Nous avons disposรฉ dโรฉchantillons de sang du groupe A1 et A2 dans des tubes ร essai diffรฉrents.
Sur chaque รฉchantillon de sang est mentionnรฉ le groupe correspondant.
Dans les tubes, il y a environ 3 cc de sang auquel, nous avons ajoutรฉ 1ml dโeau physiologique.
Aprรจs agitation, le mรฉlange obtenu est soumis a une centrifugation (1000trs /mn) pendant 5mn.
Le surnageant formรฉ est versรฉ et le culot dโhรฉmaties obtenu est de nouveau mis en suspension sous agitation avec de lโeau physiologique.
Cette opรฉration est reprise quatre fois de suite dans les mรชmes conditions.
Dilution des hรฉmaties
Elle est faite ร 5%, soit une goutte dโhรฉmaties lavรฉes pour 19 gouttes dโeau physiologique dans de nouveaux tubes portant le nom des sous groupes A correspondant aux hรฉmaties utilisรฉes .
Techniques dโagglutinationย
Technique en tubeย
Nous avons utilisรฉ deux tubes contenant respectivement trois gouttes dโhรฉmaties diluรฉe ร 5% du groupe A1 et A2, pour chaque extrait. 50ฮผl dโextrait vรฉgรฉtale est ajoutรฉ dans chacun des tubes.
Aprรจs 5mn dโincubation, le mรฉlange est centrifugรฉ ร 1000trs/mn pendant 1mn.
Le culot dโhรฉmaties formรฉ au fond du tube est lavรฉ ร 3 reprises ร lโeau physiologique.
En cas de rรฉaction positive, les hรฉmaties se prรฉsentent sous forme de lambeaux fins.
Technique sur plaque
Nous avons รฉtalรฉ sur une plaque dโopaline, une goutte de sang diluรฉ ร 5% des groupes A1 et A2.
A chaque goutte de sang est ajoutรฉ lโextrait vรฉgรฉtal ร volume รฉgal .
Le mรฉlange est ensuite triturรฉ avec de lโextrรฉmitรฉ infรฉrieure dโun tube ร hรฉmolyse.
Aprรจs, la plaque est oscillรฉe lentement pendant quelques secondes, puis laissรฉe au repos.
Au bout de 2 mn, nous avons procรฉdรฉ ร la lecture des rรฉactions dโagglutination ร lโoeil nu.
Les tests nรฉgatifs sont contrรดlรฉs au microscope optique ร lโobjectif 10.
Technique
A 150ฮผl dโune solution de sucre dosรฉe ร 2g / ml est ajoutรฉ 20ฮผl de solution dโextrait.
Ce mรฉlange est agitรฉ et laissรฉ au repos pendant 5mn puis testรฉ ร volume รฉgal sur 50ฮผl dโhรฉmaties diluรฉes ร 5%, รฉtalรฉes sur une plaque.
Ces hรฉmaties sont triturรฉes ; aprรจs oscillation de la plaque , la lecture de lโagglutination est faite ร lโoeil nu dans les 2 ร 3mn..
Interprรฉtationย
Un extrait est considรฉrรฉ comme spรฉcifique ร un sucre dans le cas ou ce dernier parvient ร inhiber au prรฉalable les rรฉactions dโagglutination en agissant probablement avec les lectines sensรฉes รชtre dans lโextrait.
COMMENTAIRES ET DISCUSSIONS
Le travail que nous avons rรฉalisรฉ, rentre dans le cadre de lโรฉtude de lโactivitรฉ hรฉmagglutinante des phytoagglutinines que sont les lectines.
Pour mener ce travail ร bien, il nous a fallu adapter un protocole dโextraction et des techniques dโagglutination ร nos conditions de laboratoire puisque la manipulation des extraits de lectine nโest pas aisรฉe.
Cโest pourquoi, nous avons tenu compte dans notre protocole dโextraction de la nature protรฉique des lectines en utilisant lโeau physiologique comme solvant ร basse tempรฉrature.
Nous avons รฉgalement procรฉdรฉ ร une mรฉthode dโextraction proche de celle dโAnimashaun qui a beaucoup travaillรฉ sur lโactivitรฉ agglutinante des lectines sur les hรฉmaties (Animashaun, 1983).
Quand aux techniques dโagglutination que nous avons employรฉes, elles ont รฉtรฉ รฉlaborรฉes par Beth Vincent et permettent dโidentifier des antigรจnes ร la surface des hรฉmaties ร lโaide dโanticorps ou de phytoagglutinines (Letonturier, 1996).
Nous avons observรฉ lโactivitรฉ hรฉmagglutinante des extraits de quatre plantes dont deux ont donnรฉ un test positif, il sโagit des extraits dโErythrina senegalensis et dโArbrus precatorius.
Les extraits de Cassia alata et de Swartia madagascariensis nโont pas agglutinรฉ les hรฉmaties ; mais il est ร noter que les extraits de Swartzia madagascariensis ont provoquรฉ une hรฉmolyse, comme cela a รฉtรฉ prรฉcedemment annoncรฉe par Pousset en 2004.
Cette activitรฉ hรฉmolytique est due ร la prรฉsence de saponoside dans les graines (Kerharo et Adam, 1974).
Dans le but dโamรฉliorer lโactivitรฉ hรฉmagglutinante des extraits, nous avons procรฉdรฉ ร leur purification par la chromatographie sur gel.
En effet, les filtrats obtenus ร la purification ont eu une activitรฉ supรฉrieure ร celle des extraits initiaux.
Ce rรฉsultat pourrait insinuer que le filtrat contient moins dโimpuretรฉ sans รชtre un extrait pur de lectine, car comme lโa dit Bruneton : lโobtention dโextrait pur de lectine nโest pas facile ร rรฉaliser (Bruneton, 1987).
En tout cas, une augmentation de lโactivitรฉ des extraits est importante pour la suite de nos investigations.
Ainsi, nous avons procรฉdรฉ ร la lyophilisation des extraits actifs pour รฉviter leur dรฉtรฉrioration lors de la conservation.
Aussi, les tests dโagglutination ont รฉtรฉ opรฉrรฉs sur des hรฉmaties du groupe A dans les sous -groupes A1 et A2 ; ce qui a donnรฉ une activitรฉ plus รฉlevรฉe des extraits dโArbrus precatorius par rapport ร ceux dโErythrina senegalensis.
Cela nous a amenรฉ ร dire que les extraits dโArbrus precatorius pourrait contenir plus de phytoagglutinine ou bien reconnaissent mieux ou plus dโantigรจne sur les globules rouges.
Pour lever cet รฉquivoque, nous avons du point de vue quantitatif, observรฉ que les agglutinations de lโextrait dโArbrus precatorius nรฉcessite une quantitรฉ de lyophilisat infรฉrieure ร celle utilisรฉe dans le cas dโErythrina senegalensis pour un mรชme volume de solvant (en comparant les rรฉsultats du Tableau 4 et Tableau 5).
Cette รฉvaluation quantitative nโest pas une indication prรฉcise parce quโelle nโexprime pas directement les doses de lectine pure.
Sur le plan qualitatif, les tests dโinhibition des agglutinations ont permis de faire une รฉvaluation des extraits relative ร leur spรฉcificitรฉ ร des sucres tรฉmoins, portรฉs par certains antigรจnes de groupe sanguin.
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Table des matiรจres
Premiรจre partieย
Introduction
Objectifs
Deuxiรจme partieย
Revue de la littรฉrature
Troisiรจme partie : Notre รฉtude
Matรฉriels et Mรฉthodes
Rรฉsultats et Analyses
Commentaires et Discussions
Conclusionย
Rรฉfรฉrences bibliographiquesย
Annexes
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