Les lectines et le groupe sanguin A

Caractรจres remarquables

La plante est une liane volubile de 3 ร  4m, ligneuse ร  la base, capable de sโ€™enrouler autour des arbustes.
Les feuilles sont alternes, paripennรฉes avec 7 ร  10 paires de folioles.
Les fleurs sont de couleur rose, regroupรฉes en courtes grappes pรฉdonculรฉes avec des bractรฉes ร  la base du calice.
Les gousses mesurent environ 3 cm de long et contiennent 5 ร  6 graines ovoรฏdes de couleur rouge vif comportant une tache noire (Boullard, 2001 ; Adjanohoun et coll, 1979).

Habitatย 

Cโ€™est une espรจce pantropicale, localisรฉe dans les forรชts denses et les galeries forestiรจres en savane (Adjanohoun et coll, 1979).

Emploisย 

Elle est considรฉrรฉe comme une plante toxique, son utilisation est surtout externe :
? Les graines sont รฉcrasรฉes pour traiter les abcรจs, les inflammations des bras et des jambes ;
? Le macรฉrรฉ ou dรฉcoctรฉ des feuilles est employรฉ contre les conjonctivites ;
? Les feuilles sucrรฉes sont aussi utilisรฉes comme antitussif et antigastralgique (Kerharo et Adam, 1974).
Dans les ouvrages sacrรฉs des indes, les graines servaient de mรฉdicament contre les affections du systรจme nerveux et des maladies de la peau (Kerharo et Adam, 1974).
Elles sont aussi utilisรฉes pour confectionner des chapelets dโ€™oรน le nom dโ€™arbre ร  chapelet donnรฉ ร  la plante (Arbonnier, 2002).
Au Mali, la plante est employรฉe comme antitussif et aphrodisiaque (Adjanohoun et coll, 1979 ).

Drogue

Elle est constituรฉe par les graines.
Les graines sont ovoรฏdes, brillantes, bicolores : la rรฉgion du hile est pourpre presque noire, le reste รฉtant rouge (Bruneton, 1987).

Phytochimie

On savait que les graines contiennent une phytoxine protรฉique : lโ€™abrine qui est une aminoacide, le N- mรฉthyltryptophane, constituรฉe de lโ€™albumine et la globine .
En plus de lโ€™abrine, les graines renferment : de lโ€™acide abrique, des terpรจnes, du ฮฒ sistรฉrol, du stigmastรฉrol, de lโ€™acide gallique, un alcaloรฏde, de lโ€™acide polygalacturonique, du pentosane, des sucres rรฉducteurs, un glucoside et une hรฉmagglutinine qui se comporte comme enzyme lipolitique (Kerharo et Adam 1974).
Les racines, les tiges, et les feuilles sont riches en glycyrrhizine qui donne aprรจs hydrolyse deux molรฉcules dโ€™acide glucuronique (Iserin et coll, 2001).

Pharmacologie

La toxicitรฉ de la graine nโ€™est possible quโ€™une fois le tรฉgument externe dur est enlevรฉ, sinon elle รฉchappe ร  la dรฉsintรฉgration lors de la digestion et la toxine ne serait pas libรฉrรฉe (Kerharo et Adam, 1974).
Dโ€™aprรจs Diacono, lโ€™extrait aqueux des graines rรฉcentes possรจdent une toxicitรฉ plus รฉlevรฉe que celui des anciennes graines sur le cobaye (Desai et Sirsi, 1966).
Par contre les extraits alcooliques sont douรฉs dโ€™une activitรฉ antibactรฉrienne sur : Staphylococcus aureus, Escherichia coliโ€ฆ .
Cette activitรฉ antibactรฉrienne est surtout รฉlevรฉe avec les extraits ร  base de tรฉgument (Desai et Sirsi, 1966).
Par ailleurs des effets abortives et tรฉratogรจnes de lโ€™extrait des graines ont รฉtรฉ observรฉs aprรจs des essais histopathologiques sur des rats et des souris (Iserin etcoll, 2001).

Caractรจres remarquables

Arbuste buissonnant, originaire dโ€™Amรฉrique tropicale, long de 2 ร  3 m, ramifiรฉ ร  la base, portant des branches tendres et cassantes.
Il porte de grandes feuilles composรฉes, pennรฉes, ayant environ 10paires de folioles opposรฉes, arrondies aux extrรฉmitรฉs.
Les fleurs sont jaunes trรจs ornementales, situรฉes ร  la cime oรน elles forment des grappes terminales.
Le fruit est une gousse droite ร  bordures parallรจles, disponible presque toute lโ€™annรฉe (Boullard, 2001; Lavergne et coll, 1989).

Habitat

Plante originaire dโ€™Amรฉrique, introduite dans toutes les rรฉgions tropicales, spontanรฉe ou procultivรฉe, rarement retrouvรฉe dans les agglomรฉrations (Adjanohoun et coll, 1983).

Emplois

Les feuilles fraรฎches รฉcrasรฉes sont utilisรฉes pour traiter les affections de la peau (Co, 1989).
Elles sont aussi considรฉrรฉes comme purgatif en prรฉparation buvable (Quisumbing, 1978).
Pour le traitement des cรฉphalรฉes, on place autour de la tรชte un bandeau contenant un mรฉlange de feuilles fraรฎches, dโ€™รฉcorce et de racines pilรฉes (Kerharo et Adam, 1974).
Contre les douleurs articulaires, le dรฉcoctรฉ des feuilles est administrรฉ par voie orale ou utilisรฉ comme bain (Kerharo et Adam, 1974).
Hormis le traitement des maladies, la plante possรจde dโ€™autres usages :
? La plante entiรจre sert de dรฉcor dans les jardins ;
? Lโ€™รฉcorce est utilisรฉe dans les tanneries pour confectionner le cuir ;
? Les feuilles servent ร  prรฉparer un poison de pรชche (Arbonnier, 2002).

Phytochimie

La plante entiรจre contient une quantitรฉ importante dโ€™acide chrysophanique surtout dans les fruits et de lโ€™acide cyanhydrique.
Hauptmann et Lacerda Nazario ont isolรฉ des feuilles des anthraquinones rรฉduites qui par oxydation de la rhรฉnine produisent du glucose et du rhamnose.
Dans les graines, Tiwari et Coll ont mis en รฉvidence la chrysophanol et fait lโ€™analyse des lipides.
Bouquet caractรฉrisa dans les feuilles et les รฉcorces de lโ€™espรจce congolaise des saponosides et des quinones (Kerharo et Adam, 1974).

Pharmacologie

Lโ€™usage de Cassia alata comme purgatif se justifie par la prรฉsence dโ€™anthraquinones dans les feuilles (Quisumbing, 1978).
Le dรฉcoctรฉ des feuilles fraรฎches a une activitรฉ anti-fongique dans le traitement du pityriasis versicolore, de lโ€™eczรฉma et le pied dโ€™athlete.
En effet, lโ€™acide chrysophanique trouvรฉ dans plusieurs parties de la plante, produit une action curative sur les dermatoses (Co, 1989).
Dโ€™autre part, des รฉtudes ayant portรฉ sur les extraits bruts de feuilles ont prouvรฉ des activitรฉs antalgiques et anti-inflammatoires de la plante (Villasenor et coll, 2002).

Gรฉnรฉralitรฉ sur les lectines et le groupe sanguin Aย 

Les lectinesย 

Dรฉfinitionย 

Les lectines sont des protรฉines animales ou vรฉgรฉtales capables de se fixer aux hydrates de carbone de la surface cellulaire et provoquer la liaison des cellules en amas (ABOVIE sur www.abovie.com).
Dโ€™autre part, les lectines sont considรฉrรฉes comme une famille hรฉtรฉrogรจne de rรฉcepteurs qui reconnaissent certaines structures oligosaccharidiques et jouent un rรดle majeur dans les processus dโ€™interactions entre les cellules (Hebert, 2001).

Historique

Les lectines ont รฉtรฉ dรฉcrites pour la premiรจre fois en 1888 par Stillmark ;depuis lors, beaucoup de travaux furent consacrรฉs aux lectines (Roken, 1948).
Ainsi des graines de cรฉrรฉale, la recherche des lectines fut รฉlargie aux lรฉgumineuses, ร  la laiterie โ€ฆ (Dโ€™Adamo, 1999).
Elles ont surtout รฉtรฉ utilisรฉes pour รฉtudier la physiologie ou certaines activitรฉs immunologiques des cellules (Sharon, 1972).
Dans les annรฉes 40, la purification des lectines a permis leur usage dans la dรฉtermination des groupes sanguins (Bird, 1974).
La spรฉcificitรฉ des lectines aux sucres fut vรฉrifiรฉe sur plusieurs formes de vie (animaux, insectes, mycรจtes ) pour expliquer des phรฉnomรจnes biologiques : dรฉfense des plantes contre les herbivores, insectes, mycรจtes (Pusztai et Ewen, 1999).
Ce nโ€ฒest quโ€ฒau cours des annรฉes 70 que la recherche sur les lectines a commencรฉ ร  augmenter dans le monde entier (Krispin, 1999).

Propriรฉtรฉs

Les lectines sont des protรฉines hydrosolubles retrouvรฉes surtout dans les graines des lรฉgumineuses (Etzer, 1994).
Elles ressemblent ร  des glycoprotรฉines de la membrane des cellules vรฉgรฉtales et se comportent comme des anticorps en assurant un rรดle dรฉfensif contre les bactรฉries et les champignons (Guignard, 1985).
Ce sont des substances thermolabiles, responsables de la toxicitรฉ de certaines plantes : ricin, jรฉquirity, haricot โ€ฆ (Bruneton, 1993).
Elles sont aussi reconnues pour leur spรฉcificitรฉ aux sucres, ce qui a permis leur usage dans la dรฉtermination des groupes sanguins (Bird, 1974) et ร  lโ€™รฉtude des structures osidiques de la membrane cellulaire, importantes pour รฉlucider certains comportements de la cellule (Hebert, 2001).

Description de quelques lectines connues

Lโ€™abrine et la ricine sont des lectines ร  activitรฉ hรฉmagglutinante extraites respectivement de lโ€™arbre ร  chapelet et du ricin, reconnues pour leur toxicitรฉ.
Elles sont constituรฉes de deux fragments protรฉiques :
– une chaรฎne A : incapable de franchir les membranes cellulaires, inhibiteur de la synthรจse des protรฉines ;
– une chaรฎne B : non cytoxique, assurant la reconnaissance des sucres membranaires et la fixation de la lectine sur le rรฉcepteur pour faciliter la translocation de lโ€™unitรฉ A ร  travers la membrane (Bruneton, 1987).
La phasine est une phytoagglutinine provenant du haricot, spรฉcifique aux hรฉmaties du groupe A, constituรฉe de deux dimรจres canoniques rattachรฉs par des liaisons bรชta (Hamelryck, 1996).
En gรฉnรฉral, on distingue trois types majeurs de lectines vรฉgรฉtales que sont :
– Les mรฉrolectines incapables de se lier aux cellules (lectines des orchidรฉes) ;
– Les hololectines capables dโ€™agglutiner les cellules (lectines des lรฉgumineuses) ;
– Les chimรฉrolectines qui se comportent soit en hololectines ou en mรฉrolectines (ricine).

Le groupe sanguin A

Dรฉfinition

Les groupes sanguins constituent un ensemble dโ€™antigรจnes allotypiques regroupรฉs en systรจmes gรฉnรฉtiquement induits (Sultan, 1978). Le groupe sanguin A est une composante du systรจme ABO, caractรฉrisรฉ par un antigรจne non protรฉique, donc qui nโ€™est pas un produit direct de gรจne, de nature glucidique : la N-acรฉtylgalactosamine (Genetet et Muller, 1999).

Structure chimique

Le groupe sanguin A comprend plusieurs variantes antigรฉniques ; en pratique courante, ce nโ€™est que deux phรฉnotypes qui sont recherchรฉs : A1(80%) et A2 (20%) possรฉdant 2 ร  3 fois moins dโ€™antigรจnes que A1 (Bastie, 1998).
Lโ€™expression phรฉnotypique de lโ€™antigรจne A est sous la dรฉpendance du gรจne A responsable de la formation de lโ€™antigรจne A dont la structure chimique est la NAcetyl- D-Galactosamine (representรฉ ci-dessous).
Lโ€™antigรจne A ainsi constituรฉ est accolรฉ ร  la substance H qui est la structure de base des groupes sanguins du systรจme ABO (Najman, 1994).

Les lectines spรฉcifiques au groupe sanguin Aย 

La spรฉcificitรฉ de la lectine du Phaseolus limensis au groupe sanguin A est due ร  son affinitรฉ trรจs รฉlevรฉe de liaison ร  la N-acรฉtyl galactosamine (Hamelryck et coll, 1996).
Cette lectine a une structure quaternaire semblable ร  celle de la phytoagglutinine de la Glycine soja qui agglutine en plus du GalNac, le galactose, et les glycoprotรฉines ร  galactose terminal (Sharon, 1972).
La lectine du Dolichos biflorus agglutine fortement les hรฉmaties A1 et trรจs faiblement celles du type A2 (Chassaigne, 1984).
Cela sโ€™explique par la prรฉfรฉrence de cette lectine au trisaccharide GalNac ฮฑ1-3 Fuc ฮฑ1-2 Gal beaucoup plus retrouvรฉ chez les hรฉmaties A1 (Hamelryck et coll, 1999).

Sรฉlection des hรฉmaties du groupe A

Les hรฉmaties du groupe A ont รฉtรฉ testรฉes ร  lโ€™anticorps anti A1 : les hรฉmaties qui ont produit une forte agglutination sont du sous groupe A1et celles qui ont donnรฉ une agglutination trรจs faible ou un test nรฉgatif sont du groupe A2 .
Les hรฉmaties ainsi obtenues ont รฉtรฉ au prรฉalable soumises ร  un lavage puis ร  une dilution.

Lavage des hรฉmaties

Nous avons disposรฉ dโ€™รฉchantillons de sang du groupe A1 et A2 dans des tubes ร  essai diffรฉrents.
Sur chaque รฉchantillon de sang est mentionnรฉ le groupe correspondant.
Dans les tubes, il y a environ 3 cc de sang auquel, nous avons ajoutรฉ 1ml dโ€™eau physiologique.
Aprรจs agitation, le mรฉlange obtenu est soumis a une centrifugation (1000trs /mn) pendant 5mn.
Le surnageant formรฉ est versรฉ et le culot dโ€™hรฉmaties obtenu est de nouveau mis en suspension sous agitation avec de lโ€™eau physiologique.
Cette opรฉration est reprise quatre fois de suite dans les mรชmes conditions.

Dilution des hรฉmaties

Elle est faite ร  5%, soit une goutte dโ€™hรฉmaties lavรฉes pour 19 gouttes dโ€™eau physiologique dans de nouveaux tubes portant le nom des sous groupes A correspondant aux hรฉmaties utilisรฉes .

Techniques dโ€™agglutinationย 

Technique en tubeย 

Nous avons utilisรฉ deux tubes contenant respectivement trois gouttes dโ€™hรฉmaties diluรฉe ร  5% du groupe A1 et A2, pour chaque extrait. 50ฮผl dโ€™extrait vรฉgรฉtale est ajoutรฉ dans chacun des tubes.
Aprรจs 5mn dโ€™incubation, le mรฉlange est centrifugรฉ ร  1000trs/mn pendant 1mn.
Le culot dโ€™hรฉmaties formรฉ au fond du tube est lavรฉ ร  3 reprises ร  lโ€™eau physiologique.
En cas de rรฉaction positive, les hรฉmaties se prรฉsentent sous forme de lambeaux fins.

Technique sur plaque

Nous avons รฉtalรฉ sur une plaque dโ€™opaline, une goutte de sang diluรฉ ร  5% des groupes A1 et A2.
A chaque goutte de sang est ajoutรฉ lโ€™extrait vรฉgรฉtal ร  volume รฉgal .
Le mรฉlange est ensuite triturรฉ avec de lโ€™extrรฉmitรฉ infรฉrieure dโ€™un tube ร  hรฉmolyse.
Aprรจs, la plaque est oscillรฉe lentement pendant quelques secondes, puis laissรฉe au repos.
Au bout de 2 mn, nous avons procรฉdรฉ ร  la lecture des rรฉactions dโ€™agglutination ร  lโ€™oeil nu.
Les tests nรฉgatifs sont contrรดlรฉs au microscope optique ร  lโ€™objectif 10.

Technique

A 150ฮผl dโ€™une solution de sucre dosรฉe ร  2g / ml est ajoutรฉ 20ฮผl de solution dโ€™extrait.
Ce mรฉlange est agitรฉ et laissรฉ au repos pendant 5mn puis testรฉ ร  volume รฉgal sur 50ฮผl dโ€™hรฉmaties diluรฉes ร  5%, รฉtalรฉes sur une plaque.
Ces hรฉmaties sont triturรฉes ; aprรจs oscillation de la plaque , la lecture de lโ€™agglutination est faite ร  lโ€™oeil nu dans les 2 ร  3mn..

Interprรฉtationย 

Un extrait est considรฉrรฉ comme spรฉcifique ร  un sucre dans le cas ou ce dernier parvient ร  inhiber au prรฉalable les rรฉactions dโ€™agglutination en agissant probablement avec les lectines sensรฉes รชtre dans lโ€™extrait.

COMMENTAIRES ET DISCUSSIONS

Le travail que nous avons rรฉalisรฉ, rentre dans le cadre de lโ€™รฉtude de lโ€™activitรฉ hรฉmagglutinante des phytoagglutinines que sont les lectines.
Pour mener ce travail ร  bien, il nous a fallu adapter un protocole dโ€™extraction et des techniques dโ€™agglutination ร  nos conditions de laboratoire puisque la manipulation des extraits de lectine nโ€™est pas aisรฉe.
Cโ€™est pourquoi, nous avons tenu compte dans notre protocole dโ€™extraction de la nature protรฉique des lectines en utilisant lโ€™eau physiologique comme solvant ร  basse tempรฉrature.
Nous avons รฉgalement procรฉdรฉ ร  une mรฉthode dโ€™extraction proche de celle dโ€™Animashaun qui a beaucoup travaillรฉ sur lโ€™activitรฉ agglutinante des lectines sur les hรฉmaties (Animashaun, 1983).
Quand aux techniques dโ€™agglutination que nous avons employรฉes, elles ont รฉtรฉ รฉlaborรฉes par Beth Vincent et permettent dโ€™identifier des antigรจnes ร  la surface des hรฉmaties ร  lโ€™aide dโ€™anticorps ou de phytoagglutinines (Letonturier, 1996).
Nous avons observรฉ lโ€™activitรฉ hรฉmagglutinante des extraits de quatre plantes dont deux ont donnรฉ un test positif, il sโ€™agit des extraits dโ€™Erythrina senegalensis et dโ€™Arbrus precatorius.
Les extraits de Cassia alata et de Swartia madagascariensis nโ€™ont pas agglutinรฉ les hรฉmaties ; mais il est ร  noter que les extraits de Swartzia madagascariensis ont provoquรฉ une hรฉmolyse, comme cela a รฉtรฉ prรฉcedemment annoncรฉe par Pousset en 2004.
Cette activitรฉ hรฉmolytique est due ร  la prรฉsence de saponoside dans les graines (Kerharo et Adam, 1974).
Dans le but dโ€™amรฉliorer lโ€™activitรฉ hรฉmagglutinante des extraits, nous avons procรฉdรฉ ร  leur purification par la chromatographie sur gel.
En effet, les filtrats obtenus ร  la purification ont eu une activitรฉ supรฉrieure ร  celle des extraits initiaux.
Ce rรฉsultat pourrait insinuer que le filtrat contient moins dโ€™impuretรฉ sans รชtre un extrait pur de lectine, car comme lโ€™a dit Bruneton : lโ€™obtention dโ€™extrait pur de lectine nโ€™est pas facile ร  rรฉaliser (Bruneton, 1987).
En tout cas, une augmentation de lโ€™activitรฉ des extraits est importante pour la suite de nos investigations.
Ainsi, nous avons procรฉdรฉ ร  la lyophilisation des extraits actifs pour รฉviter leur dรฉtรฉrioration lors de la conservation.
Aussi, les tests dโ€™agglutination ont รฉtรฉ opรฉrรฉs sur des hรฉmaties du groupe A dans les sous -groupes A1 et A2 ; ce qui a donnรฉ une activitรฉ plus รฉlevรฉe des extraits dโ€™Arbrus precatorius par rapport ร  ceux dโ€™Erythrina senegalensis.
Cela nous a amenรฉ ร  dire que les extraits dโ€™Arbrus precatorius pourrait contenir plus de phytoagglutinine ou bien reconnaissent mieux ou plus dโ€™antigรจne sur les globules rouges.
Pour lever cet รฉquivoque, nous avons du point de vue quantitatif, observรฉ que les agglutinations de lโ€™extrait dโ€™Arbrus precatorius nรฉcessite une quantitรฉ de lyophilisat infรฉrieure ร  celle utilisรฉe dans le cas dโ€™Erythrina senegalensis pour un mรชme volume de solvant (en comparant les rรฉsultats du Tableau 4 et Tableau 5).
Cette รฉvaluation quantitative nโ€™est pas une indication prรฉcise parce quโ€™elle nโ€™exprime pas directement les doses de lectine pure.
Sur le plan qualitatif, les tests dโ€™inhibition des agglutinations ont permis de faire une รฉvaluation des extraits relative ร  leur spรฉcificitรฉ ร  des sucres tรฉmoins, portรฉs par certains antigรจnes de groupe sanguin.

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Table des matiรจres

Premiรจre partieย 
Introduction
Objectifs
Deuxiรจme partieย 
Revue de la littรฉrature
Troisiรจme partie : Notre รฉtude
Matรฉriels et Mรฉthodes
Rรฉsultats et Analyses
Commentaires et Discussions
Conclusionย 
Rรฉfรฉrences bibliographiquesย 
Annexes

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