Le rôle des kératines dans la tumorigénèse

Table des matières

REMERCIEMENTS
AVANT-PROPOS
RESUME
LISTE DES FIGURES ET TABLEAUX
LISTE DES ABRÉVIATIONS, SIGLES ET ACRONYMES
CHAPITRE 1 INTRODUCTION
1.1 La progression tumorale
1.1.1 La chimiorésistance
1.1.2 La formation des métastases
1.2 La transitionépithéliale-mésenchymateuse dans la progression tumorale
1.3 Le cytosquelette de filaments intermédiaires
1.3.1 Les kératines de l’épithélium
1. 3 .1.1 L’expression des kératines est spécifique au type d’épithélium et à son stade de différenciation
1.3.1.2 Les kératines préservent l’intégrité physique de la cellule
1.3.1.3 Le rôle des kératines dans l’homéostasie cellulaire
1.3.2 Les kératines dans le cancer
1.3.2.1 Intérêt diagnostique et pronostique des kératines .
1.3.2.2 Le rôle des kératines dans la tumorigénèse
1.4 La signalisation intracellulaire oncogénique régulée par Akt
1.4.1 L’activité spécifique des isqformes d’Akt dans les tumeurs
1.4.2 Le rôle des isoformes d’Akt dans la croissance tumorale
1.4.3 Le rôle des isoformes d’Akt dans la chimiorésistance
1.4.4 Le rôle des isoformes d’Akt dans la migration cellulaire
1.4.4.1 Akt1 favorise le potentiel invasif
1.4.4.2 Akt2 facilite aussi la motilité cellulaire
1.4.4.3 Les isoformes d’Akt peuvent jouer des rôles opposés dans la progression tumorale
1.4.4.4 Le cytosquelette de filaments intermédiaires influence la localisation d’ Akt
1.5 Problématique et objectifs de recherche
CHAPITRE II AKT ISOFORMS REGULATE INTERMEDIATE FILAMENT PROTEIN LEVELS IN EPITHELIAL CARCINOMA CELLS
Résumé
Abstract
Introduction
Materials and methods
Celllines and reagents
Transfection with short hairpin RNAs (shRNAs) and plasmids
Western blots and qRT-PCR
Immunofluorescence
Statistical analyses
Results
Aktl and Akt2 isoforms differentially-regulates IF proteins levels in epithelial carcinoma cells
Akt2 isoforms induces a reorganization of cytoplasmic IFs network in epithelial carcinoma cells
IFs are up-regulated by TGF-bl and insulin in PI3K-dependent manner in epithelial carcinoma cells
Discussion
Acknowledgements
References
CHAPITRE III KERATIN 8 AND 18 LOSS IN EPITHELIAL CANCER CELLS INCREASES COLECTIVE CELL MIGRATION AND CISPLATIN SENSITIVITY THROUGH CLAUDIN1 UP-REGULATION
Résumé
Abstract
Introduction
Experimental procedures
Cell culture, transfection and reagents
Subcellular fractionation
Immunoblotting and immunoprecipitation
Immunofluorescence
Wound-healing assay
Matrigel invasion assay
PI3K assay
Conventional RT-PCR
Quantitative real-time RT-PCR
Chromatin immunoprecipitation (ChIP) assay
Luciferase reporter assay
Determination of apoptosis level
Statistical analysis
Results
Keratin 8 and 18 knockdown increases epithelial cancer cell motility and invasion without modulating EMT markers
Keratin 8 and 18 knockdown improves PI3K1Akt activation in epithelial cancer cells
Keratin 8 and 18 knockdown increases NF-KB transcriptional activity through PI3K pathway
Keratin 8 and 18 knockdown increases expression of the tight junction protein claudinl through NF-KB transcriptional activity
Claudinl is involved in cell motility and invasion of K8/18-deficient cells
Claudinl increases PI3K activity and phosphorylated Akt localization at the plasma membrane in K8/18-knockdown cells
Claudinl modulates invasiveness of K8/18-knockdown cells by increasing NF-KB-induced MMP2 and MMP9 expression
K8/18 knockdown increases cisplatin sensitivity
Discussion
Acknowledgements
References
CHAPITRE IV CONCLUSION ET PERSPECTIVES
4.1 L’agrégation péri-nucléaire ou l’absence complète de kératines induit un h ‘ typ’ ‘f t h » ‘bl 115 P eno e mvaSI e c IffilosenSI e
4.2 Les kératines répriment le potentiel invasif en préservant les niveaux d’expression et la localisation membranaire de la claudine-1
4.3 Les kératines participent à la spécificité fonctionnelle des isoformes d’Alet
4.4 Les cellules épithéliales cancéreuses peuvent devenir invasives suite à la perte des K8/18 sans subir une EMT
4.5 Le maintien ou la réexpression des kératines: une stratégie thérapeutique pour empêcher la progression tumorale
REFERENCES BIBLIOGRAPIDQUES
ANNEXE A FUNCTIONAL SPECIFICITY OF AKT ISOFORMS IN CANCER PROGRESSION
ANNEXEB SIMPLE EPITHELIAL KERATINS K8 AND K18 : FROM STRUCTURAL TO REGULATORY PROTEIN