Soutenance mémoire
Préparation de l’extrait brut
Après séchage à l’ombre, les racines de SR 01 ont été broyées à l’aide d’un broyeur électrique. Cinq cent grammes de poudre de racine de SR 01 ont été macérées dans 2,5 litres d’un mélange alcool-eau (70 : 30) pendant 2 fois 48 heures. Les filtrats ont été mélangés et évaporés sous vide à l’aide d’un Rotavapor (Buchi type W 240) à la température de 60°C. L’extrait brut sec ainsi obtenu a été dénommé EB et le rendement a été déterminé en fonction du poids de l’extrait par rapport au poids de la poudre.
EXTRAITS ADMINISTRES
Les produits administrés par voie orale ont été dissous dans de l’eau distillée, sauf la fraction chlorofomique qui a été dissoute dans de l’huile d’olive. Par ailleurs, les extraits injectés par voie i.v. ont été préparés dans du sérum physiologique (NaCl 90/00) et centrifugés à 2000 tours par minute pour éliminer les particules résiduelles en suspension.
ETUDE IN VIVO DES EFFETS DE SR 01
1. Etude du comportement : L’effet de l’extrait brut (EB), la fraction chloroformique (FChl) et la fraction aqueuse (Faq) de SR 01 sur les comportements copulatoires a été évalué sur des jeunes souris mâles adultes (12 semaines) et âgées (45 semaines). Les animaux ont reçu une dose unique de 200mg/kg ou la même dose répétée pendant 7 jours. Les souris femelles ont été prétraitées avec de l’acétate de norethistérone à la dose de 0,5mg/kg 24 heures avant le test pour les rendre réceptives aux mâles (AMIN et coll., 1995). Juste après l’administration des extraits, les souris mâles ont été individuellement placées dans des cuvettes en plastique de 28x28x12cm de dimension. Après une heure, la souris femelle a été introduite dans chaque cuvette et le comportement de la souris mâle a été ensuite observé pendant 4 heures. La variation de fréquence de montée a été notée toutes les premières 15 minutes de chaque heure (AMIN et coll., 1995 ; NELSON et coll., 1995 ; SUBRAMONIAM et coll., 1997). La montée a été définie comme étant toute tentative de copulation des souris mâles avec ou sans intromission ou avec ou sans éjaculation. Après chaque observation, les souris femelles ont été enlevées et mises dans une cuvette séparée. Deux lots ont servi de témoins. Le premier lot a reçu de l’eau distillée et le deuxième de l’huile d’olive avec un volume respectif de 10ml/kg. La sildénafil a été utilisé comme produit de référence et administrée chez le lot témoin positif à la dose de 10 mg/kg.
2. Effet sur les réflexes péniens : Des jeunes souris mâles adultes de 15 semaines, pesant 25 g en moyen ont été anesthésiées avec du thiopentone injecté par voie i.p. à la dose de 200mg/kg. Le pénis a été libéré de son fourreau en disséquant la partie inférieure abdominale. La prostate et les tissus adipeux ont été écartés de l’organe. Le muscle du bassin a été légèrement pressé à l’aide d’une pince à bout rond pour libérer totalement l’organe (AMIN et coll., 1995). Puis l’extrait brut a été injecté par voie i.v. rapide dans la veine caudale chez les animaux traités, à la dose de 200mg/kg. Par contre, du sérum physiologique (NaCl 90/00) a été injecté chez le lot témoin au volume 10ml/kg. Le groupe témoin positif a reçu de la Yohimbine utilisée comme substance de référence à la dose de 10mg/kg, injectée par voie i.v. dans la veine caudale de la souris. L’évaluation du test a été basée sur l’étude de la variation du pourcentage de population des souris ayant présentée une érection définitive et une augmentation de volume pénien due à l’afflux sanguin suite à l’injection des produits.
3. Effet sur la vésicule séminale d’un rat castré : La castration chez les mammifères adultes provoque des conséquences sur les caractères sexuels modifiant ainsi leur comportement. Les glandes annexes de l’appareil génital mâle (vésicules séminales et prostate) s’atrophient suite à cette opération (COQUELIN et coll., 1982 ; DAVIDSON et coll., 1978). Pour étudier l’effet des extraits de SR 01 sur la vésicule séminale, des rats mâles adultes de poids moyen de 250 g ont été castrés. Les animaux ont été anesthésiés avec de l’éther diéthylique, les deux testicules ont été enlevés avec l’épididyme (ANG et coll., 2000 ; DORFMAN, 1969). Puis les extraits ont été quotidiennement administrés par voie orale à la dose de 200 mg/kg pendant 7 jours. L’acétate de testostérone a été utilisé comme produit de référence et injecté tous les jours par voie sous cutanée à la dose de 0,1 mg/kg chez le lot témoin positif (ANG et coll., 2000). Chez deux autres lots ayant servi de témoin, le premier a reçu de l’eau distillée tandis que le deuxième de l’huile d’olive au volume respectif de 10 ml/kg. Après 7 jours de traitement, les animaux ont été sacrifiés, exsanguinés et disséqués. Les vésicules séminales ont été prélevées et pesées. La variation des poids des vésicules séminales chez les animaux castrés a été étudiée par rapport à ceux du groupe témoin non castré.
4. Effet sur la pression artérielle : La présence d’hyperhémie au niveau des oreilles des souris lors des tests préliminaires laisse supposer que l’extrait brut agirait au niveau du système vasculaire périphérique. Pour vérifier cette hypothèse, des rats de souche WISTAR de deux sexes pesant en moyenne 250g ont été anesthésiés par voie i. p. avec du thiopentone à la dose 300mg/kg. La veine jugulaire gauche, la carotide droite ainsi que la trachée artère ont été dégagées et canulées avec des tubules siliconés. La trachée a été cathétérisée pour faciliter la respiration, tandis que la veine jugulaire a servi pour injecter de l’héparine à 500UI pour éviter la coagulation du sang dans les cathéters, ainsi que les différentes doses d’extrait brut (25, 50, 100, 200, 400mg/kg). La carotide a été reliée à un manomètre à mercure (Palmer) couplé à un capteur de pression artérielle électronique (Elcomatique EM 751) et un oscillographe (Harvard) pour enregistrer la variation de la pression artérielle (PANG et coll., 1985). La DE50, la dose d’extrait brut produisant une diminution de 50% de la pression artérielle chez le rat a été calculée par régression linéaire dans la partie droite de la courbe effet-dose.
TOXICITE AIGUE
La toxicité de SR 01 ainsi que leurs effets secondaires ont été étudiées chez la souris. Les animaux ont été répartis par lot de 10 souris. Ils ont été mis à jeun pendant 24 heures avant le test mais reçu de l’eau à volonté. Les extraits ont été administrés par voie orale à des doses allant de 250mg à 2g/kg. Le lot témoin a uniquement reçu de l’eau distillée 10ml/kg. Les signes d’intoxication ainsi que le taux de mortalité ont été observés à 5, 15, 30 minutes et 1, 2, 3, 6 et 24 heures après l’administration des extraits. L’observation a été poursuivie jusqu’au septième jour (MALONE et ROBICHAUD ; 1962).
Effet de l’extrait brut de SR 01 sur les réflexes péniens
L’injection de l’extrait brut et de la Yohimbine chez la souris mâle provoque une augmentation du volume pénien due à l’afflux sanguin au niveau du pénis et une érection. La Figure 6 rapporte la variation du pourcentage des souris anesthésiées qui présentent un changement d’état du pénis suite à l’injection par voie I.V. rapide d’extrait brut de SR 01, de la Yohimbine et du sérum physiologique à NaCl 9 %0. L’extrait brut injecté à la dose de 200 mg/kg provoque une érection chez 33,33 ± 2,8 % des souris. Aucune des souris ayant reçu de l’eau distillée ne présente une érection. Chez le groupe traité, 62,5 ± 5,1 % des souris présentent un pénis engorgé de sang, contre 20,84 ± 0,7% chez le groupe témoin. La différence est significative (P < 0,05). Les Figures 7 et 8 illustrent l’état du pénis d’une souris en érection et l’état du pénis d’une souris gonflé par du sang suite à l’injection I.V. rapide de l’extrait brut de SR 01. L’injection de la Yohimbine chez le groupe témoin positif à la dose de 10 mg/kg provoque une érection chez 16,7 ± 2,8 % des souris traitées et une augmentation de volume pénien due à l’afflux sanguin chez 75 ± 1,9 % des souris traitées. La différence avec le groupe témoin est significative (P < 0,05).
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Table des matières
LISTE DES TABLEAUX
LISTE DES FIGURES
LISTE DES ABREVIATIONS
INTRODUCTION
MATERIELS ET METHODES
I – ETUDE PHYTOCHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait brut
2. Fractionnement
3. Criblage chimique
II – TESTS BIOLOGIQUES
A – EXTRAITS ADMINISTRES
B – ANIMAUX D’EXPERIMENTATION
C – ETUDE IN VIVO DES EFFETS DE SR 01
1. Etude du comportement
2. Effet sur les réflexes péniens
3. Effet sur la pression artérielle
4. Effet sur la vésicule séminale d’un rat castré
D – ETUDE IN VITRO DE L’EFFET DE L’EXTRAIT BRUT DE SR 01
E – TOXICITE AIGUE
E – ANALYSE DES RESULTATS
RESULTATS
I – TESTS PHYTOCHIMIQUES
1. Extraction
2. Criblage chimique
II – TESTS BIOLOGIQUES
1. Effet sur le comportement copulatoire des souris mâles
a/ Effet de l’administration de SR 01 à la dose de 200 mg/kg sur des souris mâles adultes ( 12 semaines )
b/ Comparaison des effets de SR 01 administrées à dose unique et ceux du traitement de 7 jours sur des jeunes souris mâles adultes de 12 semaines
c/ Effet des extraits de SR 01 sur le comportement copulatoire des souris mâles âgées de 45 semaines
2. Effet de l’extrait brut de SR 01 sur les réflexes péniens
3. Effet de SR 01 sur le poids des vésicules séminales
4. Effet sur la pression artérielle
5. Effet sur l’aorte isolée de rat
a/ Effet-concentration de l’extrait brut de SR 01 sur l’aorte isolée de rat
b/ Effet-concentration de l’extrait brut de SR 01 sur l’anneau d’aorte isolée de de rat en présence d’Atropine
6. Toxicité aiguë
DISCUSSION
CONCLUSION
REFERENCES
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